天天操天天干天天做-天天操天天搞-天天操天天看-天天操天天噜-天堂电影免费在线资源-天堂电影在线

您好,上海研謹生物科技有限公司!
服務熱線:400-665-0203
研謹手機版
基因克隆服務
產品編號:PR0066183
別名  
英文名  
基因克隆服務
提供商:         上海研謹生物
服務名稱:       基因克隆服務
規格:           實驗服務
價格:        2000元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!
 

 
基因克隆
 
 
 
一.目的基因的獲得
目的基因是指所要研究或應用的基因,也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種,如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等,其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應(PCR) 或逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR) 體外擴增目的DNA--片段是目前zui常用的方法。
 
()采用限制性酶切法直接分離目的基因
1、從原核基因組中制備原核基因組相對較小,用幾種限制性內切酶分別消化原核基因組,或用某種限制性內切酶對所要研究的基因組進行部分消化,可以得到大小不等的各種片段,其中有些片段就會含有目的基因,將這些片段插入載體中進行克隆,經過篩選,可以得到所需的目的基因。
2.從真核基因組中制備真核基因組比較大,直接用限制性內切酶消化后需要篩選的克隆數太多,不易操作。可以用一種限制性內切酶先消化基因組DNA,產生連續的DNA--片段,然后電泳分離這些DNA--片段,再用-段特異探針與這些DNA--片段進行雜交,在含有特異性模板的區域就會出現雜交帶,可以初步鑒定基因組中是否含有目的基因。我們也可以將酶切后的基因組DNA--片段全部克隆入適當的載體中,制成基因組文庫,再用特異性探針與基因組文庫中的不同克隆進行雜交,陽性克隆即示克隆到的DNA--片段含有特異基因序列。將陽性克隆測序,用第--個克隆片段的末端分離下一個克隆片段,然后利用DNA--片段間的重疊順序來鑒定其他克隆。這樣一步步走下去,最終可得全部基因序列,這種技術叫做染色體步移(chromosome walking)。
 
(二)采用PCR或RT-PCR方法制備目的基因
1.根據已發表的基因序列設計并合成引物,采用PCR (以基因組DNA為模板)或RT-PCR (以mRNA為模板)從組織或細胞中獲取目的基因片段用于基因操作,這是實驗室中zui常用的獲取已知基因的方法。
2.利用PCR獲取目的基因的一大優點就是可以根據需要在引物序列上設計適當的酶切位點起始密碼子或終止密碼子等,或通過人為錯配改變堿基序列(人工突變)對目的基因進行有限修飾。對于未知基因,可采取構建RT-PCR文庫的方法獲得未知基因:利用mRNA末端poly A序列尾設計共用引物,將所有mRNA逆轉錄成cDNA.利用各種工具酶在cDNA末端加尾,然后采用一對共用引物擴增所有cDNA--片段,將經PCR擴增后的片段插入到適當載體中,構建成PCR-CDNA文庫。這種方法的優點是可以將表達水平很低的mRNA擴增出來,有利于篩選出表達豐度低的基因。由于經過PCR擴增,基因序列的精確性需要采用其他方法進一步確定。
3.還有一個獲得目的基因的方法是利用計算機技術進行計算機克隆。即利用GenBank中的基因信息,通過軟件比較不同種屬基因之間的相似性(同源性),利用保守區序列設計引物, 再用PCR或RT-PCR從不同種屬或不同組織細胞中獲取未知的基因片段。這是目前可實現的一種獲得新基因的捷徑。
(三)基因組文庫或cDNA文庫的構建和篩選
1.將基因組DNA用限制性內切酶消化后插入到適當載體中,得到含有不同插入片段的克隆載體,這種克隆載體的混合物含有長短不同的基因組片段,這就是基因文庫。若將細胞內所有mRNA均逆轉錄成cDNA,然后將所有cDNA--片段克隆到適當的載體中,構建成含有不同cDNA--片段的克隆載體混合物,這就是cDNA文庫。目前許多組織或細胞的基因組或cDNA文庫都可以從商業公司買到。
2.當獲得了基因組文庫或cDNA文庫,可以根據已知的信息合成特異性探針,采用核酸分子雜交的方法從文庫中篩選感興趣的基因片段,這仍是目前獲得新基因的一種常用手段。基因組文庫或cDNA文庫的構建和使用請參見本書相應的章節。
 
 
從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。
實驗代做:
Elisa免費代做 Wb代做 蛋白芯片定制 石蠟冰凍切片
HE染色 透射電鏡 掃描電鏡服務 免疫共沉淀
流式細胞分選 CCK8檢測代做 組織芯片微陣列 免疫細胞化學ICC
熒光染料標記 油紅O染色 免疫熒光染色 免疫共沉淀(Co-IP)實驗
熒光定量PCR 探針合成 酪蛋白酶譜MMP 免疫組化IHC
激光共聚焦 蛋白雙向 蛋白相互作用 課題協助外包
CBA流式多因子 瓊脂糖凝膠電泳 疾病模型 藥理毒理
研謹手機版
在線客服

微信賬號
主站蜘蛛池模板: 日韩午夜剧场| 午夜院线| 全黄a一级裸片| 在线观看国产一区亚洲bd| free性videos西欧极品| 久久综合五月天婷婷伊人| 午夜影院网页| 天天艹天天操| 亚洲日b| 天天艹夜夜| 国产欧美日韩在线| 欧美日韩性高爱潮视频| 精品在线免费观看视频| 精品久久久久久国产| 国产女人91精品嗷嗷嗷嗷| 成人高清网站| 国产日韩一区二区三区在线观看| 无遮羞成人的动漫在线观看| 污视频网页| 午夜影院毛片| 亚洲国产成人va在线观看| 欧美一区二区在线播放| 国产日韩欧美另类重口在线观看| 亚洲美女高清aⅴ视频免费| 中文字幕日本一区| 国产麻豆免费| 亚洲人成一区二区三区| 欧美性4khd| 亚洲最大福利视频网站| 亚洲成年人| 国精品午夜dy8888狼人| 小黄鸭视频破解版| 国内一区二区三区精品视频| 日韩 欧美 中文字幕 不卡| 中文日韩欧美| 日韩中文字幕久久久经典网| 99精品网| 黄色大片免费看| 国内在线观看精品免费视频| 最新三级网站| 精品国产91久久久久|