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酪蛋白酶譜MMP(3/10)檢測實驗
產品編號:PR0066136
別名  
英文名  
酪蛋白酶譜MMP(3/10)檢測實驗
酪蛋白酶譜MMP(3/10)檢測實驗
 
實驗方法介紹
基質金屬蛋白酶(MMP)酪蛋白酶譜法(casein-zymography) 電泳分析試劑是一種旨在通過酪蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法,在分離、蛋白復性、底物水解、染色等系列步驟下,觀察并半定量深藍色背景中的白色清晰的基質金屬蛋白酶條帶,根據分子量確定特異基質金屬蛋白酶及其活性的權wei而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取樣品(動物、人體、植物、昆蟲等)、培養 上清懸液、血清和關節滑液或腦脊液等基質金屬蛋白酶- 1, 3,7以及12等活性及其抑制劑的檢測。
 
實驗技術背景
基質金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases; MMPs) 是類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。迄今為止發現的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(xtracellular matrix)成分,同時參與胚胎發育、形態形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、 組織再吸收(tissue resorption)、 疾病發生,例如關節炎、癌細胞浸入轉移等根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類:
 
(1)膠原酶: MMP1、MMP8、MMP13 主要消化I、II、 II、 VII、 X型膠原和蛋白多糖;
 
(2)明膠酶(IV型膠原酶) : MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B, 主要消化IV、V. VII、 X型膠原和彈性纖維;
 
(3)基質溶解素: MMP3、MMP7、MMP16、MMP11,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、II、IV、V. VII、IX膠原及MMP1、 MMP8、 MMP9;
 
(4)膜型金屬蛋白酶: MT1-MMP、 MT2-MMP、 MT3-MMP,主要作用于明膠、IV型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs,當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成,合成的MMPs 以無活性的酶原(proenzyme) 形式分泌到細胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs, 形成瀑布效應。酪蛋白酶譜法(casein-zymography) 電泳分析技術使用-酪蛋白作為酶的底物,具有簡便,無需抗體,同步觀察多種酶以及活化與否的優勢。
 
研謹生物酪蛋白酶譜法MMP3/10檢測實驗服務案例介紹
 
本實驗采用酶譜法(zymography)檢測MMP-3、MMP-7、 MMP-10活性,Zymography是一種基于SDS-PAGE電泳的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM (10~100 pg),高于ELISA方法。通過制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠,含蛋白酶的樣品在凝膠進行電泳,電泳結束后取出凝膠與酶反應Bufer孵育,凝膠進行考馬斯亮藍染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區域,從而能同時指示MMP-3/10的大小位置(酶譜)及活性。
 
樣品準備要求
 
1)血漿/血清/上清或體液樣品準備:血漿或血清樣本加入1/10體積的檸檬酸鈉,1000rpm離心20分鐘, 留取上清,以BCA法測定蛋白濃度,測定濃度以后,取約30ug蛋白上樣進行電泳檢測。樣本準備后可暫時4°C保存,不立即測定的樣品需 -70°C保存,但不宜超過10天。
 
2)組織樣本準備:取100mg新鮮組織以2m勻漿液進行勻漿(勻漿劑: 0.1M Tris/ HCI/pH 7.4 ,0.5%TritonX-100, 0. 1mg/ml PMSF),12000g 4°C離心5分鐘,移取上清層至另一新的1m離心管待測,取30ug蛋白上樣進行電泳檢測。樣本準備以后,樣品可暫時4°C保存,不立即測定的樣品需 -70°C保存,但不宜超過10天。
 
3)細胞樣本準備:取1個6孔板細胞(每孔 細胞量約2*106個細胞), 離心后以500u勻漿液進行超聲勻漿(勻漿劑: 0.1M Tris/HClpH 7. 4 ,0.5% TritonX-100,0.1mg/ml PMSF),12000g 4°C離心5分鐘,移取上清層至另一新的1m離心管待測,取30ug蛋白 上樣進行電泳檢測。樣本準備以后,樣品可暫時4°C保存,不立即測定的樣品需-70°C保存,但不宜超過10天。
 
實驗須知
1)實驗用試劑由實驗室免費提供;
2)檢測系統含陽性參照或內參;
3)提供原始膠片;
4)實驗委托方只需提供檢測樣品。
Elisa免費代做
蛋白實驗:Elisa免費代做  Wb代做  蛋白雙向  蛋白相互作用
病理實驗:HE染色  透射電鏡  掃描電鏡  油紅O染色  激光共聚焦  石蠟切片
免疫細胞化學ICC    免疫組化IHC   免疫熒光染色
 
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實驗代做:
Elisa免費代做 Wb代做 蛋白芯片定制 石蠟冰凍切片
HE染色 透射電鏡 掃描電鏡服務 免疫共沉淀
流式細胞分選 CCK8檢測代做 組織芯片微陣列 免疫細胞化學ICC
熒光染料標記 油紅O染色 免疫熒光染色 免疫共沉淀(Co-IP)實驗
熒光定量PCR 探針合成 酪蛋白酶譜MMP 免疫組化IHC
激光共聚焦 蛋白雙向 蛋白相互作用 課題協助外包
CBA流式多因子 瓊脂糖凝膠電泳 疾病模型 藥理毒理
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