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產(chǎn)品類別：紅細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：HES-TBD550
 
產(chǎn)品名稱：羥乙基淀粉550(本公司專利產(chǎn)品)
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/瓶
 
產(chǎn)品價格：￥180.00元
 
本公司專利產(chǎn)品：羥乙基淀粉商品名為HES-TBD550（羥乙基淀粉550），克分子滲透壓為308 mosm／L，膠體滲透壓為68／36 mmHg,可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結(jié)構(gòu)形成的結(jié)果，由大的HES-TBD550（羥乙基淀粉550）分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550（羥乙基淀粉550）同時還阻礙白細胞和內(nèi)皮細胞的黏附，并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低，從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經(jīng)HES-TBD550（羥乙基淀粉550）處理后，可使紅細胞沉積至試管底，對其它主要成分包括干細胞無影響。經(jīng)這樣處理后，實驗時間相對較短（平均為1.5 h），步驟相對較少，細胞污染幾率小，從而使細胞數(shù)損失減少。結(jié)論證明，與相應的干細胞分離液聯(lián)合分離使用羥乙基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。 
 
HES-TBD550 （ 羥乙基淀粉 550）
 
 
 
【產(chǎn)品介紹】
 
HES 是從支鏈淀粉衍生出來的，是富含淀粉的復合物，其生理和化學特性主要由羥乙基
 
取代度即取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強，有效提高紅細胞的沉降速度，從而使紅細胞與其它細胞分離。故而，使用 HES-TBD550（羥
 
乙基淀粉 550）沉淀法是一種高效的細胞分離方法。
 
利用 HES-TBD550（羥乙基淀粉 550）與白細胞分離液聯(lián)合使用，可以高效的使白細胞
 
與紅細胞得以分離，所獲得的白細胞純度高且可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。
 
間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細胞、成脂肪細胞、骨髓基質(zhì)細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經(jīng)細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養(yǎng)基的差異以及分離、擴增分化過程中操作技術(shù)等多種因素有關(guān)。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細胞儀法和免疫磁珠法。流式細胞儀法對細胞損傷較大，免疫磁珠法價格相對較貴且由于抗原抗體反應也容易改變細胞原有特性，而 HES-TBD550（羥乙基淀粉 550）聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結(jié)合使用,可提高所得 UCB-MSCs 的純度，目前研究多采用此法。國內(nèi)不少學者采用羥乙基淀粉沉淀紅細胞，然后再進行離心分離單個核細胞，也取得不錯結(jié)果。實驗證明采用隨機數(shù)字表法，將每份臍血隨機分入兩個不同處理組，從而將臍血樣本的個體差異減小到最小程度。結(jié)果證實，HES-TBD550（羥乙基淀粉 550）聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細胞數(shù)量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實驗采用的羥乙基淀粉商品名為
 
HES-TBD550（羥乙基淀粉 550），克分子滲透壓為 308mosm／L，膠體滲透壓為 68／36 mmHg,
 
可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結(jié)構(gòu)形成的結(jié)果，由大的 HES-TBD550
 
（羥乙基淀粉 550）分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550（羥乙基淀粉 550）同時
 
還阻礙白細胞和內(nèi)皮細胞的黏附，并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低，從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經(jīng) HES-TBD550（羥乙基淀粉 550）處理后，可使紅細胞沉積至試管
 
底，對其它主要成分包括干細胞無影響。經(jīng)這樣處理后，實驗時間相對較短（平均為 1.5 h），步驟相對較少，細胞污染幾率小，從而使細胞數(shù)損失減少。結(jié)論證明，與相應的干細胞分離

液聯(lián)合分離使用羥乙基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。
 
【使用方法】方法一：傳統(tǒng)方法
 
 
 
注：吸取上清用細胞洗滌液（Cat#：2010X1118）洗滌備用，用戶可根據(jù)實際情況收集紅細胞重復上述步驟。
 
方法二：最大數(shù)量目的細胞提取方法
 

• 取新鮮抗凝血一份與一份羥乙基淀粉 550（Cat#：HES-TBD550）混勻，30℃-37℃反應 5-10 分鐘（5ml 以下樣本反應 5 分鐘，5ml 以上樣本反應 10 分鐘）。

 

• 反應后再與一份全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）混勻，室溫（25℃-30℃）自然沉降 30 分鐘。

 

• 將上清小心加于相應細胞分離液之液面上，按照相應分離液說明書方法進行離心操作；另將沉淀的紅細胞用全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）重新懸起，并小心加于細胞分離液之液面上，按照相應分離液說明書方法進行離心操作；

 

• 離心后根據(jù)對應說明書方法收集步驟 3 中兩個離心管所富集的目的細胞，獲得最大數(shù)量的目的細胞。

 
 
方法三：最高純度目的細胞提取方法
 
在使用目的細胞分離液離心分離步驟后，吸取目的細胞層，按照“方法一”中操作步驟將目的細胞提純,棄去紅細胞。
 
【產(chǎn)品性能指標】
 
溶液 注射用水
 
滲透壓 280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素	﹤0.5EU/ml
無菌	直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物	每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒
	20 粒以下，含 25μm 以上的不溶性微粒 5 粒
	以下
無支原體無病毒	已檢測
保存期限	2 年
貯藏	4℃—25℃

 
 
【產(chǎn)品標準編號】
 
【注意事項】
 

• 啟封后應置 4℃保存，避免微生物的污染。

 

• 整個分離過程中，溫度應控制在 20℃±2℃且在無菌環(huán)境下進行，避免微生物的污染，否則會影響分離質(zhì)量。

 
 
 
【參考文獻】
 
［1］ Meier C, Middelanis J, Wasielewski B, et al. Spastic paresis after perinatal brain damage in rats Is reduced by human cord blood mononuclear cells［J］. Pediatric Research, 2006,59(2):244-249.
 
［ 2 ］ Boyle AJ, Schulman SP, Hare JM , et al. Stem cell therapy for cardiac