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大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用)
產品編號:WBC1083
別名 大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用) 
英文名  
大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用)
中文名稱:大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用)
中文別名:大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用)

產品類別:外周血白細胞的分離
 
產品編號:WBC1083
 
產品名稱:大鼠外周血白細胞分離液試劑盒(分子生物學及細胞培養專用)
 
產品規格:200ml/KIT
 
產品價格:¥650.00元
 
 
本品用于分離大鼠外周血白細胞
 
“XXXX”動物外周血白細胞分離液實驗方法
 
(細胞培養及分子生物學專用)
 
技術文檔編號:TBD0031SOP
 
【產品規格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
 
  名稱 產品編號 規格
       
A XXXX 動物外周血白細胞分離液   200ml
       
B 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
E 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
首先取抗凝血,根據樣本量大小,分以下兩種情況:
 
情況 A:血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:
 
  • 取一支 15ml 離心管,先加入 5ml 分離液
 
  • 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,500-800g,離心 20-30min(注:如改變血液樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果。)
 
  • 離心后用吸管小心吸取所有環狀乳白色細胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產品編號:2010X1118),混勻細胞。250g,離心 10min。重復洗滌 2-3 次,即得所需白細胞。
 
  • 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液(產品編號:NH4CL2009)裂解紅細胞,具體操
 
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
 
情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
 
  • 取一支適當的離心管,先加入與樣本等量的分離液。
 
  • 將血液樣本小心加于分離液之液面上,550-850g(最大離心力可至 1000g),離心20-30min。(注:根據血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
 
  • 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果,最好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
  • 本實驗最好不要使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。
 
  • 當血液樣本粘度過高需稀釋時,最優稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產品編號:2010C1119)1:1 稀釋混勻備用。注:不當的稀釋方法會降低細胞得率及活性。如血液樣本經過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯系技術支持以尋求幫助。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶可適當進行參考。
 
  紅細胞   白細胞   血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40% 3%-8%  
           
 
【相關實驗技術方案】
  • 所獲得白細胞的培養技術。
 
  • 所獲得白細胞的核酸提取技術。
 
  • 所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現情況 出現原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環層彌散 細胞密度過大 調整細胞密度
   
離心后白環層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
 
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
 
 
 
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