中文名稱:豚鼠胰島細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:豚鼠胰島細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:豚鼠胰島細(xì)胞分離液試劑盒
產(chǎn)品類別:胰島細(xì)胞的分離
產(chǎn)品編號:ISC2011G
產(chǎn)品名稱:豚鼠胰島細(xì)胞分離液試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:2X200ml/Kit
產(chǎn)品價(jià)格:¥800.00元
本品用于分離豚鼠胰島細(xì)胞
“XXXX”動(dòng)物胰島細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
技術(shù)文檔編號:TBD0048SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
2×200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
產(chǎn)品編號:ISC2011G
產(chǎn)品名稱:豚鼠胰島細(xì)胞分離液試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:2X200ml/Kit
產(chǎn)品價(jià)格:¥800.00元
本品用于分離豚鼠胰島細(xì)胞
“XXXX”動(dòng)物胰島細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
技術(shù)文檔編號:TBD0048SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
2×200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | |
A | 分離液 1 | 200ml | |
B | 分離液 2 | 200ml | |
C | 試劑 F(贈(zèng)品) | F2013TBD | 200ml |
D | 樣本稀釋液(贈(zèng)品) | 2010C1119 | 200ml |
E | 清洗液(贈(zèng)品) | 2010X1118 | 200ml |
F | 說明書 | 1 份 | |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
- 首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
- 取一支 15ml 離心管,依次小心加入分離液 1、分離液 2(體積比為 3:2,試劑總量與稀釋后的樣本量相等,如組織單細(xì)胞懸液為 5ml,則先后加入分離液 1:3ml、分離液 2:2ml),制成梯度界面,各液面分層一定要清晰。
- 用吸管小心吸取組織懸液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:根據(jù)組織懸液樣本量確定離心條件,樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果)。
- 離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為五層。第一層為稀釋液層。第二層分離液 2 層。第三環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層。第四層為分離液 1 層。第五層為紅細(xì)胞層。
- 用吸管小心吸取第二層試劑 D 層和第三層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中,往所得離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
- 250g,離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
- 250g,離心 10min。
- 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。【差異貼壁法純化細(xì)胞】
(1)用胰島細(xì)胞無血清培養(yǎng)基(產(chǎn)品編號:TBD20180028)或胰島細(xì)胞完全培養(yǎng)基(產(chǎn)
品編號:TBD20180058)以 1.5-3×106 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞,將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞
板或細(xì)胞瓶中,放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
(2)2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體(俗稱為單核細(xì)胞)。
(3)10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
(4)不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
注:
- 無血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分,為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8% 經(jīng)篩選的胎牛血清。
- 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清(血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定)。
- 由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的,此法成本相對較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰
性分選。
【注意事項(xiàng)】
- 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
- 本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
- 吸取過多的目的細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。
- 如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。
【儲存條件及有效期】
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)胰島細(xì)胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)胰島細(xì)胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
紅細(xì)胞 | 白細(xì)胞 | 血小板 | |||
(4.0-10.0)×109 | |||||
含量(個(gè)/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | (1.0-3.0)×1011 |
50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】 |
- 組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
- 所獲得胰島細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得胰島細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得胰島細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長 | |
離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3. 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到最佳分離效果,
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。