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豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
產品編號:LPZ2014G
別名 豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒 
英文名  
豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
中文名稱:豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
中文別名:豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
產品類別:腫瘤細胞的分離
 
產品編號:LPZ2014G
 
產品名稱:豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
 
產品規格:3X200ml/Kit
 
產品價格:¥1200.00元
 
本品用于分離豚鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞













 
“XXXX”動物腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞
 
分離液實驗方法
 
技術文檔編號:TBD0052SOP
 
【產品規格】
 
3×200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
 
  名稱 產品編號 規格
       
A 分離液 1   200ml
       
B 分離液 2   200ml
       
C 分離液 3   200ml
       
D 試劑 F(贈品) F2013TBD 200ml
       
E 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
F 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
G 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
  • 首先制備組織單細胞懸液,制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術”。取一支適當的離心管,依次小心加入分離液 1、分離液 2、分離液 3(體積比為 3:2:1,體積總量與組織單細胞懸液體積相等),制成梯度界面,各液面分層一定要清晰。(如組織單細胞懸液樣本量為 6ml,則加入分離液 1:3ml、分離液 2:2ml、分離液 3:1ml。)
 
  • 用吸管小心吸取組織懸液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:根據組織懸液樣本量確定離心條件,樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,最大離心力可達 1200g,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
  • 離心后,此時離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層。
 
  • 用吸管吸取兩層環狀目的細胞層(如有紅細胞混雜則需用紅細胞裂解液(需另購)裂解
 
紅細胞,具體操作說明詳見“紅細胞裂解液使用說明”)到 15ml 離心管中,往所得離心
 
 
管中加入 10ml 清洗液(產品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 棄上清。
 
  • 用吸管以 5ml 清洗液(產品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 重復 6、7、8,棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果,最好在取樣 2h 內進行實驗,樣品存放時間越長,細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
  • 本實驗最好不要使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 如所實驗后細胞得率或活性過低,請聯系技術支持以尋求幫助。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶可適當進行參考。
 
  紅細胞   白細胞   血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40% 3%-8%  
           
【相關實驗技術方案】        
 
  • 組織單細胞懸液制備技術。
 
  • 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的培養技術。
 
  • 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的核酸提取技術。
 
  • 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的鑒定方法

A.流式細胞技術
 
B.免疫組化技術
 
C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現情況 出現原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環層彌散 細胞密度過大 調整細胞密度
   
離心后白環層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
 
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
 
 
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