中文名稱:猴外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:猴外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:猴外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
“XXXX”動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書
本品用于分離猴外周血中性粒細(xì)胞
技術(shù)文檔編號(hào):TBD0034SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:血液樣本量小于 5ml 時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
本品用于分離猴外周血中性粒細(xì)胞
技術(shù)文檔編號(hào):TBD0034SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | |
A | 分離液 1 | 200ml | |
B | 分離液 2 | 100ml | |
C | 清洗液(贈(zèng)品) | 2010X1118 | 200ml |
D | 紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品) | NH4CL2009 | 100ml |
E | 說(shuō)明書 | 1 份 | |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:血液樣本量小于 5ml 時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
- 取一支 15ml 離心管,先加入 4ml 分離液 1,后將 2ml 分離液 2 小心疊加于分離液 1 之上,形成梯度界面。
- 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,500-650g ,離心 20-30min(注:如改變血液樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果。)
- 離心后,離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層,上層細(xì)胞為單個(gè)核細(xì)胞層,下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層。
- 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層,如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液(產(chǎn)品編號(hào):NH4CL2009)將紅細(xì)胞裂解(具體方法見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”)即得目的細(xì)胞。
- 將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中,向所得離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):
2010X1118),混勻細(xì)胞。
- 250g,離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
- 250g,離心 10min。
- 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
- 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,依次小心加入分離液 1 及分離液 2(分離液 1 與分離液 2 比例 2:1),試劑總量與稀釋后的樣本量相等。
- 將血液樣本小心加于分離液之液面上,550-750g(最大離心力可至 1000g),離心 20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二)。
- 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。
分離圖例
【注意事項(xiàng)】
- 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
- 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心
管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)
變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
- 分離液用量大于血液樣本時(shí),分離效果更佳。
- 血液樣本不需稀釋,直接進(jìn)行分離即可。
- 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助,具體聯(lián)系方式詳見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
紅細(xì)胞 | 白細(xì)胞 | 血小板 | |||
(4.0-10.0)×109 | |||||
含量(個(gè)/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | (1.0-3.0)×1011 |
50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】 |
- 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 | |
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 | |
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | ||
離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過(guò)大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 | |
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) | 細(xì)胞密度過(guò)小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
- 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到最佳分離效果,
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。