中文名稱:豚鼠脾臟中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:豚鼠脾臟中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名:豚鼠脾臟中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
鼠組織中性粒細(xì)胞分離液KIT說(shuō)明書(shū)
本品用于分離豚鼠脾臟中性粒細(xì)胞
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
樣本稀釋液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。
方法一:細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞(具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)”)。
方法二:
1. 細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸,加于 3ml 分離液 1 之液面上,400g 離心 20min。
本品用于分離豚鼠脾臟中性粒細(xì)胞
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | |
A | 分離液 1 | 200ml | |
B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
C | 清洗液(贈(zèng)品) | 2010X1118 | 200ml |
D | 紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品) | NH4CL2009 | 100ml |
E | 紅細(xì)胞沉降液(6%羥乙基淀粉) | HES-TBD550-80 | 80ml |
F | 試劑 F | F2013TBD | 200ml |
G | 說(shuō)明書(shū) | 1 份 | |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
- 首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見(jiàn)“鼠組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
- 取一支 15ml 離心管,先加入分離液 1:3ml,后加入 80%濃度分離液 1 溶液(分離液 1:
樣本稀釋液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。
- 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上,650-800g ,離心 20-30min(注:如改變樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果)。
- 離心后,稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層,取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層(會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜),加 3-5 倍體積清洗液混勻,400g 離心 10min。
- 離心后棄上清,后可通過(guò)兩種方法去除紅細(xì)胞。
方法一:細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞(具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)”)。
方法二:
1. 細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸,加于 3ml 分離液 1 之液面上,400g 離心 20min。
- 取白色環(huán)狀細(xì)胞層,加 3-5 倍體積清洗液混勻,250g 離心 10min,重復(fù)洗滌 2-3 次,獲得目的細(xì)胞(如仍有少量紅細(xì)胞混雜,使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞)。
分離圖例:
【注意事項(xiàng)】
- 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,需在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
- 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
- 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時(shí),分離效果更佳。
- 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.
- 請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑,否則影響分離效果(離心后,紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
- 骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | |
離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過(guò)大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) | 細(xì)胞密度過(guò)小 | |
- 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
- 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到最佳分離效果,
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。