中文名稱:羊骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名:羊骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名:羊骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
“XXXX”動物骨髓中性粒細胞分離液KIT說明書
技術(shù)文檔編號:TBD0037SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
【實驗前準備】
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
2010X1118),混勻細胞。
分離圖例:
【注意事項】
【儲存條件及有效期】
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
技術(shù)文檔編號:TBD0037SOP
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | |
A | 分離液 1 | 200ml | |
B | 試劑 F(贈品) | F2013TBD | 200ml |
C | 樣本稀釋液(贈品) | 2010C1119 | 200ml |
D | 清洗液(贈品) | 2010X1118 | 200ml |
E | 紅細胞裂解液(贈品) | NH4CL2009 | 100ml |
F | 說明書 | 1 份 | |
【實驗前準備】
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
- 首先制備骨髓單細胞懸液,制備方法詳見“骨髓沖洗單細胞懸液制備技術(shù)”。
- 取一支 15ml 離心管,依次小心加入分離液 1。
- 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上,400-650g ,離心 20-30min(注:如改變樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
- 離心后,離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層,上層細胞為單個核細胞層,下層細胞為中性粒細胞層。
- 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層,如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)將紅細胞裂解(具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”)即得目的細胞。
- 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中,向所得離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:
2010X1118),混勻細胞。
- 250g,離心 10min。
- 棄上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
- 250g,離心 10min。
- 重復 8、9、10,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
分離圖例:
【注意事項】
- 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果,需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗。
- 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
- 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時,分離效果更佳。
- 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.
【儲存條件及有效期】
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。 | ||||||||
紅細胞 | 白細胞 | 血小板 | ||||||
(4.0-10.0)×109 | ||||||||
含量(個/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | (1.0-3.0)×1011 | |||
50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | ||||||
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】 |
- 骨髓沖洗單細胞懸液制備技術(shù)。
- 所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
- 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù)。
- 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當增減轉(zhuǎn)速 |
離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | |
離心后白環(huán)層彌散 | 細胞密度過大 | 調(diào)整細胞密度 |
離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | |
- 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
- 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到最佳分離效果,離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。