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小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
產品編號:TBD2013NM
別名 小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒 
英文名  
小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文名稱:小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名:小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
鼠骨髓中性粒細胞分離液 KIT 說明書
 

本品用于分離小鼠骨髓中性粒細胞

【產品規格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
 
  名稱 產品編號 規格
       
A 分離液 1   200ml
       
B 樣本稀釋液 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
       
E 紅細胞沉降液(6%羥乙基淀粉) HES-TBD550-80 80ml
       
F 試劑 F F2013TBD 200ml
       
G 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
  • 首先制備骨髓單細胞懸液,制備方法詳見“鼠骨髓沖洗單細胞懸液制備技術”。
 
  • 取一支 15ml 離心管,先加入分離液 1:3ml,后加入 80%濃度分離液 1 溶液(分離液 1:
 
樣本稀釋液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。
 
  • 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上,650-800g ,離心 20-30min(注:如改變樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,稀釋液層下出現兩層白色環狀細胞層,取下層白色環狀中性粒細胞層(會有少量紅細胞混雜),加 3-5 倍體積清洗液混勻,400g 離心 10min。
 
  • 離心后棄上清,后可通過兩種方法去除紅細胞。
 
方法一:細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞(具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”)。
 
方法二:
 
1.  細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸,加于 3ml 分離液 1 之液面上,400g 離心 20min。
 
  • 取白色環狀細胞層,加 3-5 倍體積清洗液混勻,250g 離心 10min,重復洗滌 2-3 次,獲得目的細胞(如仍有少量紅細胞混雜,使用紅細胞裂解液去除紅細胞)。
 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果,需在取樣 2h 內進行實驗。
 
  • 本實驗最好不使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時,分離效果更佳。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯系技術支持以尋求幫助.
 
  • 請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑,否則影響分離效果(離心后,紅細胞不能完全沉至離心管底部)。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
 
【相關實驗技術方案】
  • 骨髓沖洗單細胞懸液制備技術。
 
  • 所獲得中性粒細胞的培養技術。
 
  • 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。
 
  • 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術
 
C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現情況 出現原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環層彌散 細胞密度過大 調整細胞密度
   
離心后白環層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
 
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
 
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