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虎骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
產(chǎn)品編號:TBD2013NT
別名 虎骨髓中性粒細胞分離液試劑盒 
英文名  
虎骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文名稱:虎骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名:虎骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
XXXX”動物骨髓中性粒細胞分離液KIT說明書
 
技術(shù)文檔編號:TBD0037SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
 
  名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格
       
A 分離液 1   200ml
       
B 試劑 F(贈品) F2013TBD 200ml
       
C 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
       
D 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
E 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
       
F 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
  • 首先制備骨髓單細胞懸液,制備方法詳見“骨髓沖洗單細胞懸液制備技術(shù)”。
 
  • 取一支 15ml 離心管,依次小心加入分離液 1。
 
  • 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上,400-650g ,離心 20-30min(注:如改變樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層,上層細胞為單個核細胞層,下層細胞為中性粒細胞層。
 
  • 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層,如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)將紅細胞裂解(具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”)即得目的細胞。
 
  • 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中,向所得離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:
 
2010X1118),混勻細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 棄上清。
 
  • 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 重復(fù) 8、9、10,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
 
分離圖例:
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果,需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗。
 
  • 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時,分離效果更佳。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
 
               
  下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。
               
    紅細胞   白細胞     血小板
               
      (4.0-10.0)×109    
  含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞   單核細胞 (1.0-3.0)×1011
      50%-70% 20%-40%   3%-8%    
                 
  【相關(guān)實驗技術(shù)方案】            
 
  • 骨髓沖洗單細胞懸液制備技術(shù)。
 
  • 所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
  • 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù)。
 
  • 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當增減轉(zhuǎn)速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環(huán)層彌散 細胞密度過大 調(diào)整細胞密度
   
離心后白環(huán)層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到最佳分離效果,離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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