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人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)培養說明書

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)
貨號:HRCL-031/DDP
 
細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。。
 
細胞特性
1) 來源:肺癌
2) 形態上皮細胞樣
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
 
運輸和保存:使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
 
細胞用途:僅供科研使用。
                       
細胞培養步驟
一. 培養基培養凍存條件準備:
注意客戶收到細胞后按照下面的要求操作:培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長到 70-80%的匯合度時,去掉培養液,加入含 500ng/ml DDP藥物的培養液,放入培養箱,這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來,但是不要緊,通過換液可以去掉,下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了,這時可以一直用含藥培養液來消化培養細胞,一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml,含藥培養液用于細胞培養都沒問題的,凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。
1) 準備1640培養基(Gibco),90%;優質胎牛血清,10%,添加PS,1%,1~2ug/ml DDP。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
 
注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


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