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A型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書

A型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書
介紹
A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗體檢測試劑盒可用于檢測豬、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體,用于評估A型口蹄疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板條微孔上預包被純化的FMD病毒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有FMD病毒特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶結合物,與檢測板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍色產(chǎn)物,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。
組份
1 抗原預包被板條 1/2塊 7 陰性對照 0.8/1.6ml
2 酶結合物 11/22ml 8 陽性對照 0.8/1.6ml
3 10倍濃縮洗滌液 50/100ml 9 血清稀釋板 1/2塊
4 顯色液 11/22ml 10 封板膜 2/4張
5 樣本稀釋液 50/100ml 11 說明書 1份
6 終止液 6/11ml      
 
需自備的設備及試劑
微量移液器: 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。
一次性移液器吸頭。量筒:500ml。96孔板酶標儀。蒸餾水或去離子水。洗瓶或洗板機。
樣品制備
取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。
洗滌液的準備
濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1:100的體積比稀釋待檢血清。
注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。
注意事項
試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。
不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。
底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。
TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。
所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。
嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。
血清稀釋板為一次性用品,不得重復使用;血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。
【操作步驟】
取預包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性對照和陽性對照各2孔,取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加顯色液100μl,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內(nèi)測定結果。
結果判定
用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。
試驗成立的條件是
陰性對照(N)OD值<0.20,同時陽性對照(P)OD值〉0.3。
計算方法:
(樣品OD值-陰性OD均值)÷(陽性對照OD均值-陰性OD均值)=  IRPC值
陰陽性判斷:
IRPC<0.4判為陰性;0.4≤IRPC<0.45判為可疑;IRPC≥0.45則判斷為陽性。
有效期
貯存方法: 2 - 8oC下貯存有效期為 12個月。 
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